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(2)单因素试验结果分析
①胆固醇与卵磷脂质量比对包封率的超临影响分析
胆固醇:磷脂(W:W)对脂质体包封率的影响如图2所示,增加胆固醇用量,法优方工脂质体包封率增加,化番当胆固醇:磷脂(W:W)=9:20时,茄红脂质体包封率达到峰值。素脂继续增加胆固醇的质体用量,脂质体包封率降低。超临这是法优方工由于胆固醇具有两亲性,增加胆固醇用量,化番可以在一定程度上提高脂质体的茄红稳定性。此外,素脂胆固醇与磷脂具有较好的质体相容性,可以改善磷脂双分子层膜的超临流动性和通透性。以免双分子层过于紧密,法优方工难包埋。化番此外,胆固醇的嵌入增加了双分子层的表面积,易于番茄红素的包埋。但胆固醇用量过高时,双分子层的刚性增大,表面积变小,不易包埋芯材。
②缓冲溶液pH对包封率的影响分析
pH对脂质体的包封率如图3所示,pH为7.0时,脂质体包封率达到峰值,继续升高pH,脂质体包封率下降。这是因为pH影响脂质体表面电荷,电荷的改变会影响脂质体的结构稳定性。脂质体双分子层变得疏松,孔径变大,使所载药物溶液渗透出来,从而影响芯材的包埋。
③番茄红素与卵磷脂质量比对包封率的影响分析
番茄红素:磷脂(W:W)对脂质体包封率的影响如图4所示,脂质体包封率随着番茄红素:磷脂(W:W)的增大,先增大后减小。番茄红素:磷脂(W:W)为1:50时,包封率达到峰值。继续增加番茄红素用量,包封率下降。当番茄红素含量较低时,脂质体有足够的空间对其进行包埋。由于脂质体的载药空间有限,当番茄红素增加到一定程度时,脂质体囊泡空间饱和,药物无法再继续被包埋,所以包封率下降。
(3)响应曲面试验结果分析
①响应曲面试验设计及结果
根据单因素实验结果,以包封率为指标值,按照Box-Benhnken试验设计原理进行3因素3水平的响应面优化试验,试验设计及结果如表2所示。
②方程建立及方差分析
对试验数据进行拟合,得到包封率(Y)对胆固醇:卵磷脂(W:W)(A),缓冲溶液pH(B)番茄红素:卵磷脂(W:W)(C)的二次多元回归方程为
Y=81.02+13.73A+6.04B+02.93C-10.83AB-5.83AC-6.53BC-11.17A2-9.02B2-18.17C2。
模型方差分析如表3所示,P<0.0001<0.01,说明模型极显著,失拟项不显著,说明模型拟合程度高。模型各系数显著性检验如下:A<0.0001<0.05,B=0.0009<0.05,C<0.0393<0.05,说明胆固醇与磷脂质量比、缓冲溶液pH、番茄红素与卵磷脂质量比对包封率影响均显著。
③交互作用分析
响应曲面交互作用如图5至图7所示。
LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH,CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W),CH:PC(W:W)和缓冲溶液pH对包封率的3D图均呈抛物线状,等高线图呈椭圆状。即LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH,CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W),CH:PC(W:W)和缓冲溶液pH的交互作用对包封率都有显著影响。LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH交互作用的3D图较陡,且等高线密集。说明LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH交互作用对包封率的影响更显著,即LY:PC(W:W)和pH对包封率影响更明显。
(4)验证试验结果分析
模型预测的最优的实验条件为胆固醇与卵磷脂质量比为9:20,pH为6.99,番茄红素与卵磷脂质量比为1:50。为了实际试验条件更易于控制,选择胆固醇与卵磷脂质量比为9:20,pH为7,番茄红素与卵磷脂质量比为0.02:1。进行三次平行试验,得平均包封率为83.43%±1.15%。采用SPSSl7.0进行单样本t检验,t=-2.720,P(双侧)=0.113>0.05,说明与预测值85.24%相比无显著性差异。表明模型拟合程度高,验证了模型的可靠性。
与目前工业上使用较多的薄膜超声法、高压均质法、乙醇注入法等方法相比,超临界CO2法制备番茄红素脂质体减少了有机溶剂的加入,操作条件温和,且操作简单易行。因此制得脂质体含有较少的对人体有害的物质,制备出的脂质体结构更加稳定。整个过程无污染物排放,更符合现代化工业生产的要求。番茄红素脂质体能在很大程度上改善番茄红素溶解度低,稳定性差的弊端。对超临界法制备番茄红素脂质体的配方组成进行优化,能提高番茄红素脂质体包封率及稳定性,为制备更符合工业化生产及人体健康,有助于人体消化吸收的脂质体供了新的解决方法。
此外还为番茄红素应用开发提供了理论依据和实验基础。助于人体消化吸收的脂质体供了新的解决方法。此外还为番茄红素应用开发提供了理论依据和实验基础。
三、结论
试验以番茄红素脂质体包封率为指标,采用超临界CO2法进行番茄红素脂质体的制备。根据单因素试验及响应曲面设计的结果,对超临界法制备番茄红素脂质体的配方组成进行优化。结果表明,番茄红素脂质体的最佳配方组成参数为:胆固醇与磷脂质量比为9:20,磷酸盐缓冲pH为7.0,番茄红素与磷脂质量比为1:50,此条件下得到番茄红素脂质体的包封率为:83.4%±1.15%。
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相关链接:番茄红素,卵磷脂,胆固醇,磷酸盐
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