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植物从土壤中吸收的钾素钾,在植株组织中基本上是养分以离子态存在,它的速测试纸含量变化与土壤钾素供应状况极为敏感。植株组织中钾的硝基硝酸速测可采用压汁或浸提剂提取测定。由于组织中钾浓度一般都比土壤有效钾高得多,苯胺比浊测定方法一般不用灵敏度较高的法亚法四苯硼纳比浊法,而用灵敏度较低的钴钠六硝基二苯胺试纸法或亚硝酸钴纳法。
1、钾素方法原理
(1)六硝基二苯胺试纸法:在碱性条件下,养分六硝在二苯胺呈红色,速测试纸而在酸性条件下呈淡黄色。硝基硝酸当六硝基二苯胺与钾作用,苯胺比浊则生成桔红色的法亚法六硝基二苯胶钾盐淀沉,在酸性条件下仍保持桔红色,钴钠六硝基二苯胺的钾素浓度愈大,对钾的反应灵敏度也愈高。依据颜色的情况可以判断试样含钾量。
(2)亚硝酸钴钠比浊:亚硝酸钴钠在pH6.5~pH7.0的条件下与钾离子作用,形成K2NaCo (NO2)6黄色沉淀,这种沉淀在异丙醇中可降低其溶解度而呈现混浊,其混浊度与钾含量成正相关,因此,可根据混浊程度来判断试样含钾量。
2、仪器设备
容量瓶;小烧杯;试剂瓶;压汁器;吸管;滴管;电热吹风机;剪刀;滤纸;纱布;塑料袋。
3、试剂配制
(1)六硝基二苯胶溶液:一级溶液。称0.6g六硝基二苯胺([C6H2(NO2)3]2NH /和0.6g碳酸钠(Na2CO3)放入小烧杯中,加水搅拌,在水浴中煮沸溶解,冷却后定容25 mL;二级溶液。吸取一级溶液8 mL,加水定容为25 mL,三级溶液,吸取二级溶液10 mL,加水定容为25 mL;
(2)六硝基二苯胶钾试纸的制备:用细口皮头滴管(可用小塑料滴瓶装上注射针头),分别吸取配测好的六硝基二苯胺三级溶液,依次滴在5cm~8cm长,宽1cm的定性滤纸条上,滴点直径控制在0.5cm~0.8cm为宜。随即用电热吹风机吹干或阴干。试纸上的3个色点,依浓度高低分别呈“桔红”、“桔橙”、“桔黄”。干燥条件下,可保存1a,配制好的钾试纸最好用标准钾溶液进行标定;
(3)盐酸溶液:p=1.19g·cm-1浓盐酸4 mL,加90 mL水稀释;
(4)钾标准液:称105℃烘干的氯化钾0.7627g,溶于100 mL水中,此为p(K)=4000mg·L-1钾标准液。据此稀释配制系列钾标准液(校正钾试纸和配制比浊的系列钾标准浊度);
(5)亚硝酸钴钠母液:称5g亚硝酸钴钠[Na3CO)NO2)6〕和30g亚硝酸钠[NaNO2),溶于80 mL蒸馏水中,然后加入5 mL冰乙酸,用蒸馏水定容到100 mL,开口放置1d~2d,让有毒含氮氧化物气体逸出后应用。
(6)亚硝酸钠溶液:称15g亚硝酸钠(NaNO2)溶于100mL蒸馏水;
(7)亚硝酸钴钠稀释液:测定前,取亚硝酸钴钠母液(试剂5)5 mL与亚硝酸钠溶液(试剂6)100 mL混合摇匀。
(8)异丙醇[(CH3)2CHOH];
(9)冰乙酸(CH3000H)。
4、操作步骤
采取代表性植株10株~20株,用湿布擦干净,取其叶柄或叶鞘或茎节,剪碎、棍匀、榨汁或浸提待测。
(1)钾试纸点滴法:吸取汁液,分别滴在制配好的六硝基二苯胺试纸条的3个色点上,汁液滴量控制到湿润色点即可,经1min~2min后.向加过汁液的3个色点,各加1滴盐酸溶液(试剂3).然后观察色点褪色情况来判断汁液含钾最。
2.亚硝酸枯钠比浊法于管口直径15mm的10mL刻度试管中,加入2.5 mL亚硝酸钴钠稀释液(试剂7),滴入1滴汁液,摇匀后,加入1 mL异丙醇,再摇匀,经15 min后转入内径1.0 cm~1.2cm比浊管与同时同样操作的系列钾标准浊度比浊,可用浊度标准线或五号印刷字体上比浊定量。
5、结果计算
(1)钾试纸点滴法测定结果计算
测试时,观察到的色点变化可判断试样含钾量。当钾试纸上3个色点都变成黄色时,表示测试的汁液不含钾或钾浓度很低。3个色点都呈桔黄色时,表示含钾<500mg·L-1。仅第一级色点为桔红色时,含钾在750mg·L-1~1000mg·L-1一级和二级色点都呈枯红色时,含钾量为2000mg·L-1~3000mg·L-1。如果三个色点都呈桔红色或第三级色点呈浅桔红色,表示含钾量>3000 mg·L-1。
(2)亚硝酸钴钠钾比浊法结果计算
比浊标准: ①利用五号印刷字体透视比浊定量:显浊液转入直径1.0cm~1.2cm的比浊管,在15 min~30 min内进行比浊。比浊管背后衬一张印有五号字体的文章,透过浊液看后面字迹。如果字进清晰放大,浊液钾浓度为5 mg·L-1~10mg·L-1。字迹显示模糊,但尚能看出字迹,浊液钾浓度为10mg·L-1~15mg·L-1。如果看不清字迹,表明浊液钾浓度高于20mg·L-1。②利用分光光度计或光电比色计比浊:钾比浊系列标准曲线用4000mg·L-1钾标准液,稀释成0mg·L-1,250mg·L-1,500mg·L-1,700mg·L-1,1000mg·L-1,钾系列标准。各取1滴分别加入2.5 mL亚硝酸钻钠稀释液,摇匀,再加入1 mL异丙醉显浊。即成为0mg·L-1,5mg·L-1,10mg·L-1,5mg·L-1,20mg·L-1钾标准系列浊度,显浊后15min~30 min内,在光电比色计上用650nm建光片进行比浊,用半对数纸作出亚硝酸钻钠钾比浊标准曲线,作为同样操作显浊的试样,查出相应浊度的钾含量。
植株汁液(K)含量mg·L-1=p×V1/V2;
式中:p——比浊测得的Kmg·L-1数;
V1——显浊液总体积毫升数;
V2——比浊用汁液毫升数(以每滴为0.05 mL计)。
6、结果解释
(1)三级钾试纸测定汁液钾的评估。第一级色点褪色不完全,二、三级色点变为柠檬色,表示汁液含钾量很低,植株缺钾。第一级色点不褪色,第二级色点褪色不完全,第三级色点变为柠檬黄色,表示汁液含钾量中等。如果3个色点都呈桔红色,表示汁液含钾量高,植株不缺钾。从有关资料得知,水稻、小麦、大麦主要作物植株组织汁液钾素状况,用钾试纸测定,含量达3000mg·L-1钾以上时,表示植株钾素营养丰富,低于1000mg·L-1时,则表示植株缺钾。
(2)亚硝酸钴纳钾比浊测定结果评估
棉花叶柄的含钾量,花铃期主茎下3叶柄~4叶柄的临界浓度为0.6%。
参考资料:土壤农业化学分析方法
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