石榴（Punicagranatum）属石榴科植物，超声是波辅中国的特色果品，因适应性强、助提中总好管理，理石榴皮在我国中部、黄酮东部、艺研西部地区均有栽培。超声石榴皮中含有很多具有营养价值和药物价值的波辅有效成分，如生理活性十分广泛的助提中总黄酮类化合物、多元酚类化合物鞣质、理石榴皮生物碱类有机化合物和一些酸性有机化合物的黄酮多种有效成分。黄酮类化合物的艺研生理活性十分广泛，具有抑菌、超声抗炎、波辅降血压等多种在医学上十分重要的助提中总功能，特别是具有抗自由基、抗癌、防癌的作用，使得黄酮类化合物在医学、保健食品、天然食品添加剂，特别是天然的抗氧化剂的研究和应用上有着十分重要的地位。近年来，黄酮的需求量越来越大，不同的学者从很多类型的原材料上提取黄酮类化合物，但是已研究与开发的黄酮类产品仍属极少数。黄酮类产品具有非常大的市场需求空间。超声提取技术主要是利用超声波的空化作用加速植物细胞中有效成分的溶出，超声波提取具有省时、节能、提取率高等优点，在工业生产上已经有比较普遍的应用。

四川的攀西会理地区，拥有十分丰富的石榴资源，当地独特的南亚气候使该地区的石榴独一无二。在对石榴进行加工的同时，会留下大量的石榴皮。随着会理石榴销售量的日益增加，石榴副产物也在日益增加。这些遗留下来的石榴皮不仅造成了巨大的资源浪费，而且给环境带来严重威胁。本试验以四川会理石榴皮作为研究材料，采用超声波辅助提取工艺，研究石榴皮中总黄酮的最佳提取工艺，以期为四川攀西地区石榴皮的精深加工提供理论依据。

二、材料与方法

1、材料与试剂

试验所用石榴采自四川会理。芦丁化学对照品（标准品，成都瑞芬思生物科技有限公司）；亚硝酸钠（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）；硝酸铝（分析纯，科龙化工试剂厂）；氢氧化钠（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）。

2、仪器

电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；万分之一电子天平；XL-10B500克密封型摇摆式粉碎机（广州市旭朗机械设备有限公司）；KH3200V型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；TDL-6A离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司）；L2S可见光分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司）。

3、试验材料的处理

将会理石榴手工剥皮，将皮切碎成小颗粒（约0.5×0.5×0.5cm大小），置于白色磁盘中铺平，放入70℃的恒温鼓风干燥箱中干燥至全干。用超微粉碎机将石榴皮粉碎，过60目筛，将石榴皮细粉末装入不透光的密封样品袋中，存放在干燥器中待用。

4、标准曲线的绘制

精确称取芦丁化学对照品20mg，用浓度为30%的乙醇溶液将其溶解、定容于50mL容量瓶中，充分摇匀，最终得到浓度为0.4mg/mL的芦丁标准溶液，避光保存待用。

精确吸取上述配置好的芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL试管中，分别加入30%乙醇至5mL，编号为1、2、3、4、5、6。再各加入5%的NaNO₂溶液0.3mL，混匀，无颜色变化，静置6min，然后分别加入0.3mL10%的Al（NO₃）₃溶液，摇匀，静置6min。再分别加入4%的NaOH溶液1mL，摇匀，颜色加深，最后用30%乙醇溶液稀释至刻度，静置20～25min，并于30min后在芦丁的最大吸收峰510nm处测定光密度值。

5、黄酮类化合物的提取方法

精确称取过筛后的会理石榴皮粉0.5000g于25mL比色管中，加入一定浓度的乙醇提取液，摇匀，密封。在一定温度下（且需保持此温度）进行超声波提取一段时间后取出。将超声处理后的样品静置冷却至室温，然后进行过滤，取滤液2mL于25mL比色管中，加入对应乙醇溶液至10mL，加入5%NaNO2溶液0.6mL，摇匀后静置6min，然后分别加入0.6mL的10%的Al（NO3）3溶液，摇匀后静置6min后加入4%的NaOH溶液2mL，摇匀后用对应乙醇溶液稀释至20mL，静置20～25min后，以5000r/min的速度离心8min后在510nm下测定其吸光值，以对应乙醇溶液作为空白对照。

6、提取率的计算方法

根据标准曲线，得出芦丁含量，按下式求出样品中的黄酮含量。

式中：X—样品总黄酮提取率；

m₁—被测溶液的总黄酮含量，mg；

m—试样的质量，g；

v₁—待测液分取的体积，mL；

v₂—待测液的总体积，mL；

注：结果精确至小数点后2位。

二、结果与分析

1、标准曲线

按精确称取芦丁化学对照品20mg，用浓度为30%的乙醇溶液将其溶解、定容于50mL容量瓶中，充分摇匀，最终得到浓度为0.4mg/mL的芦丁标准溶液，避光保存待用。按照这个的方法，绘制芦丁标准曲线如图1。运用最小二乘法经线性回归，求出芦丁浓度与吸光度值关系曲线的回归方程y=0.1194x-0.0005，R²=0.9995，说明芦丁在此范围内具有良好的线性关系。

2、不同乙醇浓度对石榴皮总黄酮提取率的影响
 

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