衰老是金针生物体在正常状况下机体各组织器官功能随时间的流逝而减退，自身应急免疫能力下降，菇废菇柄内环境产生不稳定因素，发酵各结构组分发生不可抗拒的物对退行变化现象，是衰老损伤生物必然的一种过程，是模型多种因素共同作用的结果。自由基损伤学说是小鼠响解释衰老的理论之一，认为自由基和活性氧在机体内的氧化应激堆积会导致细胞和组织的损伤，造成氧化应激并引起衰老和不正常的金针细胞死亡。生物体在衰老过程中机体氧化应激水平降低，菇废菇柄代谢产物丙二醛增多，发酵抗氧化酶活力减弱，物对机体产生和清除自由基的衰老损伤平衡被破坏，使自由基堆积，模型加速衰老。小鼠响

金针菇学名毛柄金钱菌，属真菌门、口蘑科、金针菇属真菌，营养价值高，含有多糖、蛋白质、氨基酸、黄酮、萜类、核苷酸、纤维素、维生素和矿物质等成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、免疫调节、降低胆固醇含量、保肝护肝、延缓衰老等多种生理活性，是一种理想的保健食品。金针菇每年产量可达400多万吨，一般在采摘销售前，要做切根处理，产生的废菇柄每年可达30～35万吨。人们把这些废菇柄一般直接扔掉或用作动物饲料，这样不但对环境产生了污染同时也造成了资源浪费。现有资料表明，金针菇废菇柄蛋白质含量为17.02g/100gDW，氨基酸种类齐全，含有人体必需的18种氨基酸，其中总氨基酸含量为59.81％，必需氨基酸含量占总氨基酸量的40.27％。金针菇废菇柄多糖提取率可达11.09％，核苷酸提取率可达1.47％。而目前利用金针菇废菇柄进行深加工的研究还不够深入，对其深加工和商品化处理方面尚未得到充分重视。

蛹拟青霉是蛹虫草的无性型，含有大量的虫草素、虫草多糖、虫草酸等活性物质，具有增强免疫力、抗氧化、延缓衰老等生理活性。蛹拟青霉具有很好的生物转化能力可以将发酵基质进行转化，并赋予发酵菌质新的代谢产物，增强其生物活性。具有活性成分的药性基质被药用真菌发酵，它既能提供真菌所需营养大量生长菌体，同时又能因真菌的酶而改变其原来的组织成分，它具有双向性，可以在生长发育过程中进行一系列复杂的分解合成代谢，产生新的物质和新的功能。闰梅霞、贺晓玉分别研究了蛹虫草发酵人参和五味子药渣，其研究结果表明，其发酵产物中多糖、蛋白质、总皂苷和虫草素含量均得到提高。本研究以蛹拟青霉对金针菇废菇柄的发酵物为材料，测定其对D一半乳糖诱导的衰老小鼠血清和主要器官的谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、过氧化氢酶活性及丙二醛含量，探讨其对抗氧化应激损伤的影响，评估其抗氧化、抗衰老效果，为金针菇废菇柄的综合开发利用提供科学依据。

一、材料与方法

1、动物、材料与试剂

金针菇废菇柄，徐州康盛食用菌有限公司提供。

雄性ICR小鼠，体重18～22g，购于徐州医科大学，实验动物使用许可证号：SYXK（苏）2016-0028。

金针菇废菇柄发酵物由江苏省食品资源开发与质量安全重点建设实验室通过发酵制备而得，其多糖含量为678.57μg/g，虫草素含量为90.9μg/g。
D一半乳糖，国药集团化学试剂有限公司；冰醋酸，天津市福晨化学试剂厂；谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH—Px）试剂盒（20190306）、超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）试剂盒（20190302）、总抗氧化能力（Totalantioxidantcapacity，T-AOC）试剂盒（20190225）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒（20190310）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）试剂盒（20190316），南京建成生物工程研究所。

2、仪器与设备

FA一210N型电子天平，上海精密仪器有限公司；TU—1810型紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；SK—l型快速混匀器，金坛市成辉仪器；HH一4数显恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；DL-5型低速离心机，上海安亭科学仪器厂；3K15台式高速冷冻离心机，德国Sigma公司；SpectraMaxiD3型多功能酶标仪，美国MolecularDevices公司。

3、实验方法

（1）小鼠分组

将体重（20±2）g的ICR雄性小鼠随机分成6组：空白对照组（BC）；金针菇废菇柄发酵物组：低剂量组（LD）、中剂量组（MD）、高剂量组（HD）；D一半乳糖模型组（NC）；金针菇废菇柄对照组（FC），每组10只。

（2）试验给药处理

空白对照（BC）组小鼠皮下注射300mg/（kg·bw·d）无菌生理盐水，其他各组小鼠均按质量分数4％的D一半乳糖生理盐水（500mg/kg·bw·d），均连续注射6周。注射D一半乳糖同时，低剂量（LD）组每天灌胃10mL/（kg·bw）金针菇废菇柄发酵物50mg/（kg·bw）、中剂量（MD）组灌胃相同体积的金针菇废菇柄发酵物150mg/（kg·bw）、高剂量（HD）组灌胃相同体积的金针菇废菇柄发酵物350mg/（kg·bw）；金针菇废菇柄对照（FC）组灌胃相同体积的金针菇废菇柄粉150mg/（kg·bw）；空白对照（BC）组与模型对照（NC）组灌胃相同体积的生理盐水。灌胃用的金针菇废菇柄发酵物和金针菇废菇柄经干燥粉碎后，过60目筛子，并按照灌胃剂量浓度用生理盐水制备而成。每组小鼠分装在不同笼子饲养在同一个饲养室，各组小鼠饲料与水保证充足，饲养室温度控制在（20±2）℃，相对湿度控制在（50±10）％。

（3）试验组织处理

小鼠最后一次灌胃后，均禁食12h，采血前1h禁水，从小鼠眼部取血，立即4000r/min离心15min取血清，待测。

采血后立即脱颈椎处死小鼠，分别完整取出小鼠肝脏、脑、心脏，加人4℃预冷生理盐水制成10％的组织匀浆，低温离心机4℃、3000r/min离心10～15min，取上清液，加入生理盐水配制成实验所需的各浓度，待测。

（4）生化指标测定

测定GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT活性及MDA生成量指标的具体操作方法，按照试剂盒说明书上的方法进行操作，具体计算公式如下：
①GSH—PX测定：测定样品OD₄₁₂值，并按公式计算：

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