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验利用牛津杯抑菌圈法测定植物乳杆菌ZJ316、益生副干酪乳杆菌ZFM54、乳酸沙克乳杆菌ZFM225的菌筛抑菌性质。将活化后的选及响3株乳酸菌,按3%的其对接种量接至草石蚕菜汁培养基。于37℃培养24h。草石蚕汁草石蚕发酵液于8000r/min离心5min(4℃),发酵取上清液备用。特性将抑菌试验所需的益生指示菌在合适的培养条件下培养,按1%的乳酸接种量接入50℃左右融化的半固培养基中,混合均匀后倒入牛津杯的菌筛平板上,待完全冷却后拔出牛津杯。选及响用移液枪吸取150μL发酵上清液加入孔洞中,其对37℃培养12h后用游标卡尺测量抑菌圈大小。草石蚕汁
定利用德国拜发IFP维生素B9叶酸微生物法试剂盒对发酵样品中的发酵叶酸含量进行测定。按试剂盒中说明书要求对样品进行处理,将处理后的样品与培养基加入试剂盒自带的微孔板中,用粘合箔封紧后于37℃黑暗条件下培养48h。培养完成后从培养箱中取出微孔板,再次压紧粘合膜并在桌面上震荡,使微生物在培养基中混合均匀。随后轻轻撕下粘合膜,破坏微孔中的所有泡沫,并用酶标仪在波长540nm处测定微孔的0D540nm值。
将活化后的植物乳杆菌ZJ316、沙克乳杆菌ZFM225、副干酪乳杆菌ZFM54按3%的接种量接种于草石蚕菜汁培养基中,37℃培养24h后取10mL装入15mL顶空进样瓶中。将顶空进样瓶放到50℃水浴锅内加热30min,备用。
将老化后的萃取头插入进样瓶顶空部分,50℃平衡30min、吸附30min后,将萃取头取出并插GC进样口。同时启动仪器采集数据,解吸20min。
7890A/5975GC,MS联用仪;色谱柱:HP-5MS型(30m×0.250mm×0.25μm);载气:氦气;进样温度:230℃;进样量:1μL;升温程序:初温45℃保持2min,以5℃/min速率上升至180℃,保持1min后以25℃/min速率升到230℃,保持5.5min。
由计算机质谱系统NSIT检索未知化合物。匹配度大于70%的结果将予以报告,采用面积归一法计算各成分的含量。
上述所有试验均重复3次。所有数据均表示为平均值±标准偏差。数据分析使用Origin9.0处理。
乳酸菌在草石蚕菜汁培养基中的生长情况,不仅能够反映出乳酸菌对草石蚕菜汁发酵环境的适应能力,也是乳酸菌发酵性能分析的基础,因此本研究通过生长情况测定初步筛选出优质乳酸菌菌株。如图1所示,培养24h后,植物乳杆菌ZJ316、副干酪乳杆菌ZFM54、沙克乳杆菌ZFM225在草石蚕菜汁培养基中生长情况最好,0D600nm、值分别为1.84,1.64,1.58,本研究选择这3株乳酸菌进行后续试验。
接种量的多少与乳酸菌在培养基中生长情况密切相关,过小的接种量会导致乳酸菌生长密度偏低,而接种量过高则会出现营养匮乏导致菌体死亡的现象,因此确定一个最优的接种量非常重要。如图2所示,植物乳杆菌ZJ316在3%接种量处有最高活菌数8.7×108CFU/mL、沙克乳杆菌ZFM225在3%接种量处有最高活菌数1.7×108CFU/mL、副干酪乳杆菌ZFM54在3%接种量处有最高活菌数2.3×108CFU/mL。因此,植物乳杆菌ZJ316、沙克乳杆菌ZFM225、副干酪乳杆菌ZFM54的最佳接种量均为3%。
如图3所示,本次研究筛选出3株益生功能型乳酸菌ZJ316、ZFM225、ZFM54均能很好的适应草石蚕菜汁培养基的发酵环境,这3株乳酸菌均在培养8h达到指数生长期,16h达到平稳期。其中以植物乳杆菌ZJ316的生长情况最为良好,培养24h后0D600nm值可达到1.824。
如图3所示,本次研究筛选出3株益生功能型乳酸菌ZJ316、ZFM225、ZFM54均能很好的适应草石蚕菜汁培养基的发酵环境,这3株乳酸菌均在培养8h达到指数生长期,16h达到平稳期。其中以植物乳杆菌ZJ316的生长情况最为良好,培养24h后0D600nm值可达到1.824。
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